Penelitian ini bertujuan untuk mengukur dan mengetahui ada tidaknya pengaruh budaya orgasnisasi suatu organisasi terhadap kinerja karyawan. Penelitian dilaksanakan di PT. Gembiraloka Zoo Yogyakarta. Dengan jumlah sampel sebanyak 64 responden yang diambil dengan teknik probability sampling yaitu convinience sampling, dimana teknik ini mudah dan nyaman untuk digunakan. yang beralamat di Jl. Kebun Raya No.2 Rojowinangun, Kotagede, Kota Yogyakarta, Daerah Istimewa Yogyakarta.
Metode pengumpulan data dengan beberapa cara yaitu kuesioner, wawancara, dan observasi. Metode analisis data menggunakan uji prasyarat validitas dan reliabilitas, uji asumsi klasik, uji regresi sederhana, dan uji hipotesis. Hasil penelitian menunjukan bahwa budaya organisasi memiliki pengaruh yang signifikan terhadap kinerja karyawan Gembiraloka Zoo.

Kata kunci : Budaya, organisasi, kinerja karyawan.