Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh rasio bahan pendingin (es dan garam dapur) dan lama penyimpanan terhadap motilitas semen beku sapi Limousin selama thawing. Materi yang digunakan dalam penelitian ini adalah 90 straw semen beku sapi Limousin. Penelitian ini menggunakan rancangan percobaan Rancangan Acak Lengkap (RAL) pola searah dan diulang sebanyak 3 kali (straw). Faktor perlakuan yang dilakukan terdiri dari 5 taraf formulasi campuran es dan garam dapur, yaitu sebanyak 250 g es, P0 (0% garam), P1 (5% garam), P2 (10% garam), P3 (15% garam), dan P4 (20% garam). Variabel yang diamati yaitu suhu simpan dan motilitas spermatozoa. Data yang diperoleh dianalisis dengan menggunakan analysis of varians (ANOVA), selanjutnya dilakukan uji lanjut DMRT.¬ Hasil rata-rata motilitas spermatozoa dari perlakuan P0 (0% garam), P1 (5% garam), P2 (10% garam), P3 (15% garam), dan P4 (20% garam) selama 3 jam penyimpanan secara berurutan adalah 61,6%, 63,8%, 63,8%, 68,3%, dan 61,1%. Disimpulkan bahwa penggunaan garam dapur sebesar 15% adalah batas penggunaan garam dapur yang cocok sebagai bahan pendingin serta memberikan persentase motilitas tertinggi sampai penyimpanan 3 jam dengan nilai rata-rata sebesar 68,3%.